农药残留检测新方法开发原则(二)
来源/作者:中国标准物质网  日期:2021-06-20

5.定性鉴定所谓定性鉴定,就是确定色谱峰的归属。对于简单的样品,可通过标准物质对照来定性,即在相同的色谱条件下,分别注射标准样品和实际样品,根据保留值即可确定色谱图上哪个峰是要分析的组分。定性时必须注意,在同一色谱柱上,不同化合物可能有相同的保留值。所以,对未知样品的定性仅仅用一个保留数据是不够的。双柱或多柱保留指数定性是GC中较为可靠的方法,因为不同的化合物在不同色谱柱上具有相同保留值的概率要小得多。对于复杂的样品,则要通过保留指数和/或气相色谱-质谱联用法来定性。事实上,质谱是目前定性的首选方法,它可以给出相应色谱峰的分子结构信息,同时还能做定量分析。但我们应清楚,气相色-质谱联用法并不总是可靠的,尤其是一些同分异构体,它们的质谱图往往非常相似,故计算机检索结果有时是不正确的。只有当GC保留指数和MS图的鉴定结果相吻合时,定性的可靠性才是有保障的。

在日常分析中,有时因为分析样品量大或者样品基质复杂,导致进样口端的色谱柱受到污染,对我们的分析产生影响。此时,我们需要将色谱柱割掉一段来去除污染影响。当使用SIM模式采集数据时,在色谱柱维护后,化合物的保留时间就会因为色谱柱变短而出现前移,此时如果还使用原有的采集窗口,就会出现个别化合物实际出峰时间提前于窗口的采集时间,从而导致该化合物漏采。因此,为了避免漏采数据,每次色谱柱维护后,我们必须对质谱分析方法中化合物采集窗口的时间及时更新。通常选择人工的方式将各采集时间段进行更新,但相对来说非常麻烦、费时。目前有些仪器利用定位标志化合物,通过计算调节柱前压或者载气流速来自动调整保留时间。

6.定量分析这一步骤是要确定用什么定量方法来测定待测组分的含量。常用的色谱定量方法不外乎峰面积(或峰高)百分比法、归一化法、外标法、内标法和标准加入法(又称为叠加法)。

(1)峰面积(或峰高)百分比法。此法最简单,但最不准确。当样品由同系物组成,或者只是为了粗略地定量时,则可以选择该法。在有机合成过程中,监测产物的变化时常用此法进行相对定量。因为不同的化合物在同一条件下、同一检测器上的响应因子(单位峰面积代表的样品量)往往不同,故须用标准样品测定响应因子进行校正后,方可得到准确的定量结果。其他几种定量方法均需要校正。

(2)归一化法。相比起来,归一化法较为复杂,它要求样品中所有的组分均出峰,且要求有所有组分的标准品才能定量,故很少采用。

(3)外标法。此法用得较多,只要用一系列浓度的标准样品作出工作曲线(样品量或浓度对峰面积作图),就可在完全一致的条件下对未知样品进行定量分析。只要待测组分出峰且分离完全即可,而不考虑其他组分是否出峰和是否分离完全。需要强调,外标法定量时,分析条件必须严格重现,特别是进样量。如果测定未知物和测定工作曲线时的条件有所不同,就会导致较大的定量误差。还应注意,外标工作曲线最好与未知样品同时测定,或者定期重新测定工作曲线,以保证定量准确度。

(4)内标法。相对而言,内标法的定量精度最高,因为它是用相对内标物的响应值来定量的。内标物要分别加到标准样品和未知样品中,而且量要相同。这样就可抵消由于操作条件(包括进样量)的波动带来的误差。与外标法类似,内标法只要求待测组分出峰且分离完全即认可,其余组分则可通过快速升高柱温使其流出或用反吹法将其放空,这样就可达到缩
短分析时间的目的。尽管如此,但要找到一个合适的内标物并不容易,因为理想的内标物的保留时间和响应因子应该与待测物尽可能接近,且要完全分离。此外,用内标法定量时,样品制备过程要多一个定量加入内标物的步骤,标准样品和未知样品均要加入一定量的内标物。因此,如果对定量精度要求不高,则应避免使用内标法。

(5)标准加入法。此法是在未知样品中定量加入待测物的标准品,然后根据峰面积(或峰高)的增加量来进行定量计算。其样品制备过程与内标法类似,但计算原理则完全是来自外标法。标准加入法的定量精度介于内标法和外标法之间。
在上述各种定量方法中,峰面积均可用峰高代替。理论上讲,浓度型检测器用峰高定量较准确,而质量型检测器用峰面积定量更准确。在实际操作中,影响峰高和峰面积的因素有多种,不仅载气流速和柱温对其有影响,而且检测器的结构设计等均有影响。综合考虑各种因素,峰面积定量一般比峰高定量准确。然而,当峰未完全分离时,面积积分准确度会下降,此时用峰高定量不失为一种合理的选择。

图2-3 为检测方法开发的一般步骤。

图2-3 检测方法开发的一般步骤

相关链接:农药残留检测新方法开发原则(一)

 

 

文章来源:《无机化学核心教程(第二版)》

版权与免责声明:转载目的在于传递更多信息。

如其他媒体、网站或个人从本网下载使用,必须保留本网注明的"稿件来源",并自负版权等法律责任。

如涉及作品内容、版权等问题,请在作品发表之日起两周内与本网联系,否则视为放弃相关权利。